Vinicius bom dia,
Tenta fazer o seguinte, da um Split na string pegando pelos ":" depois pega o length da variável resultante, você vai conseguir chegar na quantidade de vezes que o ":" aparece.
Dim content As String = "USER1:USER2:USER3:"
Dim palavras As String() = content.Split(New Char() {":"c})
MessageBox.Show(palavras.Length - 1)
Att.
Guilherme Silva Cardoso Microsoft Student Partner